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技术简介

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料 。
 

 





技术原理
 

如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与
核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛,可利用该报告分子与荧光素标记的特
异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。



技术优势
 
1、 荧光试剂和探针经济、安全;
2、 探针稳定,一次标记后可在两年内使用;
3、 实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;
4、 FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;
5、 多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;
6、 既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。


 

应用范围
 

该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位,而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。
在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。

 
 
 
 
 
 


 
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